Guanidinhydroklorid â € “â €“ Protein refolding, solubilizing protein

        I prosessen med proteinrenaturering må inklusjonskroppsproteinet først oppløses. Inklusjonskroppsprotein refererer til aggregering av proteiner uttrykt av bakterier i celler for å danne inaktive faste partikler, som er amorfe og vannuløselige, og bare løses opp i denaturanter som urea ogguanidinhydroklorid.

Etterpå fjernes denatureringsmidlet sakte for å gjenopprette målproteinet fra den denaturerte fullstendig strukket tilstand til normal foldet struktur, mens reduksjonsmidlet fjernes for å tillate normal dannelse av disulfidbindinger. Generelt er renatureringsprosessen avguanidinhydrokloridstarter ved 4M og slutter på 1,5M. Det er flere forskjellige metoder:

Fortynning og refolding: Tilsett vann eller buffer direkte for å fortynne løsningen og la den stå over natten for å få proteinet til å falle ut. Ulempen er at volumet øker sterkt, fortynningshastigheten til denaturerende fortynning er for rask, og det er vanskelig å kontrollere; dialyse eller ultrafiltrering refolding: begge denaturanter Små molekylære stoffer kan gradvis trenge inn i den porøse membranen under dialyse eller ultrafiltrering, slik at denatureringskonsentrasjonen av den denaturerte proteinløsningen gradvis reduseres og til slutt fjernes, slik at det denaturerte proteinet brettes og foldes om. Fordelen er at den ikke øker volumet. Fjerningshastigheten til denaturerende middel kontrolleres ved gradvis å redusere konsentrasjonen av det eksterne permeatet, men prosessen er langsom og tidkrevende; renaturering på kolonnen: Renatureringen oppnås i den kromatografiske prosessen, som har blitt studert og lykkes nylig. En refold -metode som brukes i produksjonen. Fordelen er at adsorpsjonskapasiteten til den kromatografiske fiksasjonen er relativt lav sammenlignet med det denaturerte proteinet, noe som kan forbedre kvaliteten på refolding og aktivitetsutbyttet; samtidig kan det også skille målproteinet og urenhetsproteinet for å oppnå formålet med rensing; og det er praktisk å gjenvinne denaturatoren.

Protein er et biologisk makromolekyl relatert til liv, et uunnværlig stoff for å opprettholde normal fremgang i livet, og det er også andre generasjons kode for livsarv. Ulike undersøkelser på protein er også emner av mer interesse for folk, og forskningen på strukturen er også svært viktig for utviklingen av medisinen. Denaturering eller renaturering av protein er en av kjernespørsmålene i biovitenskapelig forskning. Blant dem denatureringsmidletguanidinhydrokloridkan ikke bare denaturere proteinet, lette studiet av dets struktur, men også oppløse inklusjonskroppsproteinet under renatureringsprosessen. Spilte en viktig rolle i forskningen.